核糖核酸酶 H說明書

產(chǎn)品詳情

核糖核酸酶H（RNase H）是一種核糖核酸內(nèi)切酶，它能夠特異性地水解雜交到DNA鏈上的RNA 的磷酸二酯鍵。該酶不能消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA。主要用于cDNA第二鏈合成時除去 mRNA ；以及一步法RT-PCR中去除mRNA鏈，生成cDNA單鏈，提高cDNA與引物的配對效果，改善RT-PCR效果。

本公司RNase H是重組表達(dá)，并經(jīng)多步純化制備的大腸桿菌RNase H重組蛋白。

特點(diǎn)

? 不消化單鏈RNA、單鏈或雙鏈DNA

? 熱失活：65℃×20 分鐘

濃度

5U/μl

活性定義

1單位指在溫度為37℃，1× RNase H 反應(yīng)緩沖體系的條件下，20min內(nèi)能水解20 pmol熒光標(biāo)記的50 bp RNA-DNA雜交鏈成1 nmol核苷酸所需的酶量。

活性測定條件

50 mM Tris-HCl，75 mM KCl，3 mM MgCl₂，10 mM DTT(pH 8.3 @ 25℃)，37℃溫育。

酶貯存緩沖液

10mM Tris-HCl，50 mM KCl，1 mM DTT ，0.1 mM EDTA ，200 µg/ml BSA，50% Glycerol ，pH 7.4 @ 25°C。

產(chǎn)品包裝規(guī)格及組成

適用范圍

? 除去雜交到poly(dT)上的mRNA poly(A)

? 在cDNA第二鏈合成時除去 mRNA

應(yīng)用舉例

1、RT-PCR去除RNA/DNA雜合雙鏈的RNA鏈

1）按下表配制反應(yīng)體系

2) 35°C反應(yīng)5-10min；

3) PCR反應(yīng)。

4) 瓊脂糖電泳檢測DNA，或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)

2、cDNA第二鏈合成時除去 mRNA

1）按下表配制反應(yīng)體系

2) 35°C反應(yīng)15-30min；

3) 瓊脂糖電泳檢測DNA，或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)

運(yùn)輸與保存

-20℃保存

注意事項(xiàng)

l 本RNase H為常溫酶，在16-42℃范圍內(nèi)具有高活性，最佳反應(yīng)溫度為32-37℃。

l 本酶不耐高溫，因此反應(yīng)溫度不能高于42℃。

警告: 本產(chǎn)品僅限科研實(shí)驗(yàn)使用，臨床應(yīng)用安全性和有效性未鑒定，不可用于醫(yī)療臨床診斷。

質(zhì)量控制

相關(guān)測試表明無外源內(nèi)切、外切脫氧核糖核酸酶、RNase污染。PCR方法檢測無宿主殘余DNA。