DMEM高糖培養(yǎng)基作為哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的常用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、分化及生物制品研發(fā)等場景。其使用過程中，易因儲存不當(dāng)、操作不規(guī)范、污染防控疏漏等問題導(dǎo)致培養(yǎng)基失效、細(xì)胞生長異常，影響實驗結(jié)果可靠性。本文梳理使用全流程中的常見“坑”及規(guī)避技巧，為精準(zhǔn)使用提供技術(shù)指引。

　　避坑一：儲存運輸不當(dāng)導(dǎo)致營養(yǎng)成分降解。DMEM高糖培養(yǎng)基含氨基酸、維生素等熱敏性成分，高溫或反復(fù)凍融易導(dǎo)致成分流失。需嚴(yán)格遵循儲存要求：未開封干粉培養(yǎng)基密封存放于2-8℃干燥環(huán)境，避免潮濕、陽光直射；配制后的液體培養(yǎng)基需分裝為單次使用量，-20℃冷凍保存，禁止反復(fù)凍融（建議分裝體積≤50ml）。運輸過程中需用冰袋或干冰保溫，避免溫度波動超過±5℃，接收后及時檢查外觀，若出現(xiàn)渾濁、沉淀則禁止使用。

　　避坑二：配制操作不規(guī)范引發(fā)污染或滲透壓異常。配制是關(guān)鍵環(huán)節(jié)，需嚴(yán)格無菌操作與參數(shù)控制。首先確保配制環(huán)境無菌，在超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行，實驗器具需經(jīng)高壓滅菌（121℃、20min）并干燥。按說明書精準(zhǔn)稱量干粉，加入適量無熱源超純水，磁力攪拌至全溶解（避免劇烈攪拌產(chǎn)生氣泡），隨后補(bǔ)加超純水至最終體積。關(guān)鍵一步是調(diào)節(jié)pH值，用5%NaHCO?溶液緩慢調(diào)節(jié)至7.2-7.4，過度調(diào)節(jié)易導(dǎo)致滲透壓失衡；配制完成后需經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌，過濾后及時分裝，避免長時間暴露于空氣中。

　　避坑三：忽略添加劑適配性導(dǎo)致細(xì)胞生長受阻。DMEM高糖培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，需根據(jù)細(xì)胞類型添加適配添加劑，避免盲目添加。常規(guī)需添加10%-20%胎牛血清（FBS），血清需選擇合格批次并滅活（56℃、30min），未滅活血清易引入補(bǔ)體、病毒等有害物質(zhì)；針對特殊細(xì)胞，需補(bǔ)充特定生長因子（如EGF、胰島素），添加濃度需通過預(yù)實驗確定，過量添加易導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖或分化。此外，抗生素添加需謹(jǐn)慎，長期高濃度使用會導(dǎo)致細(xì)胞耐藥性，僅在污染風(fēng)險較高時短期使用（如青霉素-鏈霉素混合液終濃度100U/ml）。
 

　　避坑四：使用過程污染防控疏漏。污染是細(xì)胞培養(yǎng)的致命問題，需從多環(huán)節(jié)規(guī)避。使用前檢查培養(yǎng)基外觀，液體培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁、絮狀物、顏色異常（如變黃過快）則為污染跡象，立即丟棄。細(xì)胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基更換周期需合理（常規(guī)2-3天更換一次），避免營養(yǎng)耗盡或代謝廢物積累；操作時避免培養(yǎng)基瓶口長時間敞開，瓶口接觸污染物后需及時更換瓶蓋。若發(fā)現(xiàn)輕微污染，禁止隨意添加抗生素挽救，應(yīng)立即丟棄污染細(xì)胞與培養(yǎng)基，消毒培養(yǎng)環(huán)境，防止污染擴(kuò)散。

　　避坑五：忽視特殊實驗需求導(dǎo)致結(jié)果偏差。不同實驗對培養(yǎng)基有特定要求，需針對性適配。例如進(jìn)行糖代謝相關(guān)實驗時，需確認(rèn)培養(yǎng)基葡萄糖濃度（高糖DMEM通常含4500mg/L葡萄糖），避免與低糖DMEM混淆；培養(yǎng)干細(xì)胞等敏感細(xì)胞時，需選用無血清、無酚紅的DMEM高糖培養(yǎng)基，減少血清成分干擾與酚紅對實驗檢測的影響。此外，培養(yǎng)過程中需監(jiān)測培養(yǎng)基pH值變化，若pH值快速下降（顏色變橙黃），可能是細(xì)胞密度過高或培養(yǎng)環(huán)境CO?濃度異常，需及時調(diào)整。

　　DMEM高糖培養(yǎng)基使用需嚴(yán)格把控儲存、配制、添加劑適配、污染防控及實驗適配五大環(huán)節(jié)，規(guī)避常見誤區(qū)。規(guī)范的操作不僅能保障培養(yǎng)基效能，更能提升細(xì)胞培養(yǎng)成功率與實驗結(jié)果可靠性，為后續(xù)研究奠定堅實基礎(chǔ)。