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1. Oligo（dT）
2. 隨機(jī)引物
3. 基因特異性引物
PART 02
逆轉(zhuǎn)錄引物優(yōu)劣勢比較
引物類型 | 結(jié)合部位 | 優(yōu)點(diǎn) | 缺點(diǎn) |
Oligo(dT) | 真核生物mRNA3’端poly(A)尾 | 可合成全長cDNA | 1、僅擴(kuò)增有polyA尾的mRNA 2、對模板質(zhì)量要求高 |
隨機(jī)引物 | RNA的許多隨機(jī)可結(jié)合部位 | 適合復(fù)雜結(jié)構(gòu)和微量模板 | 特異性低，小片段多 |
基因特異性引物 | 特異性互補(bǔ)序列 | 特異性強(qiáng)，靈敏度高 | 僅合成特定的序列 |
PART 03
逆轉(zhuǎn)錄引物的選擇
RNA類型：
1、真核生物mRNA
2、miRNA、核糖體RNA和tRNA等小RNA前體加A尾處理后的模板
Oligo(dT)
1、真核生物mRNA含有poly(A)尾，可以O(shè)ligo(dT)引物結(jié)合
2、miRNA、rRNA和tRNA本身無A尾，故需要人工處理后才能與Oligo(dT)引物結(jié)合
RNA類型：
1、rRNA、tRNA、原核生物mRNA等無3’端poly(A)尾的模板
2、長度比較長、有二級結(jié)構(gòu)存在及微量樣本的模板
隨機(jī)引物
隨機(jī)引物可以在任意位點(diǎn)和RNA結(jié)合并開始反轉(zhuǎn)
RNA類型：
1、已知基因序列的模板
2、miRNA增加莖環(huán)結(jié)構(gòu)的模板
基因特異性引物
1、針對特定序列設(shè)計(jì)的反轉(zhuǎn)錄引物
2、miRNA（莖環(huán)法）的反轉(zhuǎn)錄，需要根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)對應(yīng)的引物
【注】:為提高反轉(zhuǎn)錄效率，并保障獲得更加完整的cDNA，建議將Oligo(dT)和隨機(jī)引物混合使用。
PART 04
精品推薦
RNA類型 | 引物選擇 | 原因 |
1、真核生物mRNA 2、miRNA、核糖體RNA和tRNA等小RNA前體加A尾處理后的模板 | Oligo(dT) | 1、真核生物mRNA含有poly(A)尾，可以O(shè)ligo(dT)引物結(jié)合 2、miRNA、rRNA和tRNA本身無A尾，故需要人工處理后才能與Oligo(dT)引物結(jié)合 |
1、rRNA、tRNA、原核生物mRNA等無3’端poly(A)尾的模板 2、長度比較長、有二級結(jié)構(gòu)存在及微量樣本的模板 | 隨機(jī)引物 | 隨機(jī)引物可以在任意位點(diǎn)和RNA結(jié)合并開始反轉(zhuǎn)。 |
1、已知基因序列的模板 2、miRNA增加莖環(huán)結(jié)構(gòu)的模板 | 基因特異性引物 | 1、針對特定序列設(shè)計(jì)的反轉(zhuǎn)錄引物 2、miRNA（莖環(huán)法）的反轉(zhuǎn)錄，需要根據(jù)基因序列設(shè)計(jì)對應(yīng)的引物 |
